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          RNA提取試劑盒具體該如何操作呢?

           發布時間:2022-05-26 點擊量:89
           
            RNA提取試劑盒用于從細胞、組織、新鮮血液和病毒中提取200bp及以下的smallRNA,用LB10裂解樣品后,加入氯仿,溶液分為無色水相和粉紅色有機相,RNA在水相中;用RNA硅膠膜離心柱特異地吸附水相中的大分子量RNA(28SrRNA,18SrRNA,mRNA),流出液中的smallRNA用miRNA硅膠膜離心柱特異地吸附。與其它miRNA提取方法相比,該試劑盒裂解能力強、提取量高、專一性強,應用范圍廣。
            RNA提取試劑盒的操作步驟:
            1、樣品處理:
           ?、僦参锝M織:取新鮮或-70℃凍存100mg組織在液氮中研磨,把粉末加入到1ml裂解液中混勻。
           ?、趧游锝M織:取新鮮或-70℃凍存100mg組織加1ml裂解液,用組織研磨杵或勻漿器勻漿處理。
           ?、圪N壁細胞:直接在培養板中加入裂解液裂解細胞,每106細胞加1ml裂解液。用取樣器吹打混勻。
           ?、芗毎麘乙海弘x心收集細胞。每106動物、植物和酵母細胞或每107細菌細胞加1ml裂解液混勻。
           ?、菅禾幚恚喝?.2-1ml新鮮血液加3倍體積紅細胞裂解液,混勻后室溫放置10分鐘,10000rpm離心1分鐘。棄上清,若沉淀含有紅細胞,可加入2倍體積紅細胞裂解液重復裂解步驟。離心后沉淀加入1ml裂解液混勻。
            2、將處理后的樣品在室溫放置5分鐘,使得核酸蛋白復合物完全分離。
            3、向勻漿樣品中加0.2ml氯仿,蓋好管蓋,劇烈振蕩15秒,室溫放置3-5分鐘。
            4、2-8℃12000rpm離心10分鐘。RNA主要在上層無色的水相中,把水相轉移到新管中,不要吸到沉淀。
            5、吸附柱前處理:在吸附柱中加入500ul洗柱液,室溫放置2分鐘,2-8℃12,000rpm離心2min,棄廢液。
            6、第4步收集的上清中加入200ul無水乙醇混勻,加入吸附柱靜置2分鐘,2-8℃12000rpm離心2min,棄廢液。
            7、向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前請先檢查是否已加入無水乙醇),2-8℃12,000rpm離心2min,棄廢液。
            8、向吸附柱中加入600ul漂洗液,2-8℃12,000rpm離心2min,棄廢液。
            9、12000rpm離心2min,棄掉收集管,將吸附柱置于室溫放置數分鐘將吸附柱中殘余的漂洗液去除。
            10、將吸附柱放入新管中,向膜中央滴加50-100ulRNasefreeddH2O,室溫放置5min,12000rpm室溫離心2min即得到RNA。
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